La Vitamine K époxyde réductase (VKORC1) est une enzyme essentielle qui existe sous différentes formes, dans tout organisme vivant, eucaryote ou procaryote. Chez les mammifères, on la connaît surtout pour son rôle indirect dans la coagulation sanguine. Cette enzyme permet la régénération de la vitamine K de sa forme oxydée (époxyde) vers sa forme réduite (hydroquinone), permettant ainsi, via la γ-glutamyl carboxylase, l'activation de plusieurs facteurs de coagulation. La VKORC1 a besoin, pour être active, d'un partenaire réducteur. Cependant, ce partenaire reste méconnu. Par ailleurs, cette enzyme est la cible principale des antivitamines K, utilisés couramment comme rodonticide et comme médicament anticoagulant dans le monde. Avec l'émergence de résistance de la VKORC1 à ces antivitamines K, la caractérisation fine de cette enzyme est de plus en plus importante. Ainsi, le travail de cette thèse a été de mettre au point une méthode pour purifier la VKORC1 de souris en la gardant fonctionnelle, ce qui permettra d'envisager ultérieurement des études structurales et fonctionnelles avancées (interaction enzyme-protéines redox partenaires, enzyme-substrat et enzymes-inhibiteurs)[-]

Contrairement aux méthodes disponibles en médecine humaine, les tests d'exploration de l'hémostase en médecine vétérinaire sont plutôt limités d'un point de vue sensibilité, spécificité et précocité diagnostique et reposent le plus souvent sur une exploration globale d'une voie, telle la mesure des temps de coagulation. Notre étude expérimentale a consisté à développer et valider chez le chien une méthode de dosage chromogénique sur automate de chaque protéines vitamine K dépendantes que sont les facteurs de coagulation II, VII, IX et X ; à établir des intervalles de référence pour ces paramètres dans cette espèce ; et à réaliser une première approche de l'intérêt clinique de tels dosages. La méthode développée s'est révélée fiable, linéaire, reproductible et capable de montrer des différences significatives de niveau d'activité des facteurs en intra et inter espèce : activité plus importante des facteurs VII et X dans l'espèce canine ; activité du facteur II significativement plus importante chez la chienne ; activité du facteur X environ deux fois supérieure chez le chien comparé à l'homme. L'intérêt clinique s'est quant à lui révélé prometteur au regard des changements d'activité mis en évidence dans des contextes pathologiques en lien avec des anomalies des facteurs II, VII, IX et X. Une utilisation en routine semble donc envisageable, dans les domaines de la recherche et de la clientèle notamment, permettant une approche plus fine de l'hémostase, notamment dans des contextes de coagulopathies d'origine héréditaire, d'état de déficience en vitamine K ou en γ-carboxylation, ou encore d'état d'hyper ou d'hypocoagulabilité.[-]