La paratuberculose est une maladie courante du bétail causée par Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. Il a été suggéré que cette mycobactérie puisse jouer un rôle dans la maladie de Crohn chez l’homme. Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis peut être présente dans le lait des animaux infectés et semble avoir la capacité de résister aux traitements de pasteurisation. L’objectif de cette étude était de récolter du lait naturellement contaminé et de le soumettre à un test alliant une PCR spécifique ciblée sur IS900 et une RT-QPCR quantitative ciblée sur EF-Tu, un élément du génome bactérien présent en grande quantité, pour garantir la viabilité des éléments détectés. Méthode : Le protocole incluait 26 animaux de race laitière ayant un statut positif certain vis à vis de la paratuberculose. Les échantillons de lait étaient soumis à un premier tri par la PCR IS900. Puis la RT-QPCR devait confirmer la présence de cellules de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis vivantes et les quantifier. Résultats : La PCR IS900 a relevé des traces d’ADN de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis dans 2 des échantillons testés mais tous les autres tests se sont avérés négatifs. Discussion : Plusieurs hypothèses sont envisageables pour expliquer les résultats négatifs en culture et en RT-PCR, il est actuellement impossible de valider ce test dans le cadre de la détection de Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis dans le lait