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Les organoïdes sont des cultures cellulaires tridimensionnelles qui permettent de préserver à la fois la structure mais aussi la fonction des organes dont ils sont issus. Cette méthode de culture in vitro est récente mais déjà en plein essor chez l'humain et la souris et permet de nombreuses applications au sein de multiples champs de recherche en médecine ou en physiologie. Elle participe à la réduction du nombre d'animaux utilisés à des fins scientifiques. Le présent travail a pour objectif de recenser les organoïdes ayant été développés chez les animaux de compagnie et de rente que sont le chien, le chat, le lapin, le cheval, le poulet, le porc, le bovin, le mouton et la chèvre. Les caractéristiques structurelles et fonctionnelles de chaque organoïde ont été recherchées dans la littérature. Les avancées permises par les organoïdes développés dans certains domaines de recherche sont mentionnées, ainsi que les perspectives d'avenir pour ce modèle de culture. La littérature sur les organoïdes des animaux de compagnie et de production est bien moins prolifique que chez l'humain ou la souris, mais elle a néanmoins permis de montrer dans beaucoup de cas que la structure des organes dont les organoïdes sont issus est préservée. Par ailleurs, quand des études ciblées sur la fonction ont été menées, elles ont généralement confirmé une bonne conservation. Néanmoins, cette forme de culture tridimensionnelle reste encore parcellaire dans la modélisation complète d'un organe, absence de cellules nerveuses ou immunitaires. Au bilan, cette méthode de culture cellulaire ouvre la voie à de nombreuses avancées dans des domaines comme la médecine régénérative, l'oncologie ou l'industrie du médicament. Elle nécessite cependant un effort de caractérisation afin de parfaire son usage comme modèle de culture cellulaire in vitro en recherche vétérinaire.
[-] Les organoïdes sont des cultures cellulaires tridimensionnelles qui permettent de préserver à la fois la structure mais aussi la fonction des organes dont ils sont issus. Cette méthode de culture in vitro est récente mais déjà en plein essor chez l'humain et la souris et permet de nombreuses applications au sein de multiples champs de recherche en médecine ou en physiologie. Elle participe à la réduction du nombre d'animaux utilisés à des fins ...
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L'herpèsvirus canin (Canine Herpesvirus, CHV-1) appartient à la famille des herpesviridae. Ce sont des virus à ADN aux tropismes divers, capables de latence au sein de l'hôte. L'herpèsvirose est le plus souvent asymptomatique chez l'adulte, ou s'exprime par des troubles respiratoires et/ou oculaires. Cependant, le CHV-1 possède aussi un tropisme pour l'appareil reproducteur à l'origine, chez la chienne, d'infertilité, de mortalité embryonnaire ou d'avortement. L'herpèsvirose représente un véritable fléau chez les chiots de moins de 3 semaines puisqu'elle est responsable de mortinatalité. Au niveau de l'appareil reproducteur, particulièrement mâle, les cellules cibles de l'infection et les mécanismes de latence et de transmission sont par contre peu ou pas connus. La démonstration d'une infection de cellules testiculaires pourrait expliquer l'excrétion du virus dans le sperme canin. Dans cette étude, nous avons ciblé en première intention les cellules de Sertoli. Si elles peuvent multiplier le virus elles pourraient aisément l'excréter dans la semence. Pour cela nous avons mis en place des préparations de cellules de Sertoli de chien à partir de 4 paires de testicules récupérés lors de castrations pour effectuer 3 cultures cellulaires. Une ampoule de cellules a été congelée. Nous avons confirmé la présence de ces cellules dans nos cultures primaires par immunofluorescence ciblant le facteur SOX9, spécifique des cellules de Sertoli dans le tissu testiculaire. Nous avons également débuté une amplification de la souche virale DK13 sur des cellules MDCK permissives au virus. Notre étude, préliminaire, peut maintenant permettre de réaliser des tests d'infection in vitro par le CHV.
[-] L'herpèsvirus canin (Canine Herpesvirus, CHV-1) appartient à la famille des herpesviridae. Ce sont des virus à ADN aux tropismes divers, capables de latence au sein de l'hôte. L'herpèsvirose est le plus souvent asymptomatique chez l'adulte, ou s'exprime par des troubles respiratoires et/ou oculaires. Cependant, le CHV-1 possède aussi un tropisme pour l'appareil reproducteur à l'origine, chez la chienne, d'infertilité, de mortalité embryonnaire ...
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La peau est au centre de nombreuses études aussi bien en médecine humaine qu'en médecine vétérinaire. L'objectif de cette thèse a été d'explorer les modalités de production de peaux reconstruites de chien. Dans un premier temps, un protocole de culture de kératinocytes et de fibroblastes primaires, issus de biopsies cutanées canines, a été mis au point. Une caractérisation par immunohistochimie ou immunofluorescence, à l'aide d'une quinzaine d'anticorps de spécificités variées, a été réalisée sur la peau de chien native. Parallèlement, la mise en culture, la multiplication, dans plusieurs milieux de culture, ont été réalisés sur la lignée de kératinocytes canins CPEK. Un essai de construction d'un épiderme in vitro puis un essai de peau reconstruite complète, sur derme bio-imprimé, ont permis d'obtenir un épiderme reconstruit, bien différencié et stratifié, ainsi qu'une peau reconstruite complète. Il reste à caractériser plus en détail ces modèles, avec les marqueurs spécifiques des différentes couches de la peau, pour une comparaison précise avec la peau naturelle. En conclusion, bien que les modèles de peau reconstruite in vitro aient besoin d'être caractérisés et optimisés, ils ouvrent de nombreuses pistes d'amélioration et de développement. Ce travail de thèse a permis une avancée considérable du projet de modélisation de peau reconstruite au sein du laboratoire de dermatologie et laisse envisager de fructueuses perspectives.
[-] La peau est au centre de nombreuses études aussi bien en médecine humaine qu'en médecine vétérinaire. L'objectif de cette thèse a été d'explorer les modalités de production de peaux reconstruites de chien. Dans un premier temps, un protocole de culture de kératinocytes et de fibroblastes primaires, issus de biopsies cutanées canines, a été mis au point. Une caractérisation par immunohistochimie ou immunofluorescence, à l'aide d'une quinzaine ...
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La médecine régénérative neuronale qui associe à la fois ingénierie tissulaire et biologie cellulaire consiste à remplacer un tissu ou un organe lésé par un autre synthétique issu d'une culture cellulaire sur un support nommé scaffold. La matrice extracellulaire est donc essentielle puisqu'elle doit être mimée au mieux pour permettre une croissance optimale de cellules souches. De nouveaux gélifiants moléculaires saccharidiques, pouvant servir de supports de culture, sont étudiés dans ce travail. Le gel de N-heptyl-D-galactonamide, issu de cette famille, présente une résistance mécanique similaire à celle du cerveau et permet la culture cellulaire. Il est aussi très malléable car il peut être modelé en filament grâce à la technique du wet-spinning. Dans ces travaux, les propriétés mécaniques de ces nouveaux hydrogels sont testées et les conditions de formation des filaments par wet-spinning sont évaluées. Enfin, les conditions optimales permettant leur impression en 3D sont définies. Neuronal regenerative medicine which associates tissue engineering and cell biology consists in replacing a damaged tissue or organ by another synthetic, the result of cell culture on a scaffold. Extracellular matrix is essential because we must perfectly mime it to let the stem cells grow better. In this work, we studied new molecular saccharide-based gelling agents which may be used as scaffold. N-heptyl-D-galactonamide which belongs to this family showed a similar resistance to the resistance of the brain and cell culture is possible on it. Moreover it is malleable because we can shape coils with it due to the wet-spinning technique. In this work, we tested the mechanical properties of these new hydrogels and we evaluated the making process of materials created from these compounds using wet-spinning. Last but not least we defined optimal conditions in which these agents are printed using 3D printing technique.
[-] La médecine régénérative neuronale qui associe à la fois ingénierie tissulaire et biologie cellulaire consiste à remplacer un tissu ou un organe lésé par un autre synthétique issu d'une culture cellulaire sur un support nommé scaffold. La matrice extracellulaire est donc essentielle puisqu'elle doit être mimée au mieux pour permettre une croissance optimale de cellules souches. De nouveaux gélifiants moléculaires saccharidiques, pouvant servir ...
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Le lymphome est l'hémopathie maligne la plus représentée chez le chien. Cette entité polymorphe peut infiltrer l'ensemble de l'organisme. Ces formes anatomocliniques sont variées tout comme les entités qui les composent. Sa forme la plus fréquente, la forme multicentrique représente un véritable challenge thérapeutique puisqu'actuellement les traitements proposés sont uniquement palliatifs. La radiothérapie, méthode thérapeutique largement utilisée en cancérologie humaine mais encore peu développée en médecine vétérinaire semble un allié de choix dans la gestion des lymphomes canins de ces animaux, au-delà des quelques localisations anatomiques étant déjà des indications connues (encéphale, cavités nasales notamment). Pour autant, la littérature vétérinaire sur ce sujet est à l'heure actuelle peu développée et aucune recommandation du type « guide lines » n'a encore été publiée pour le traitement du lymphome canin par radiothérapie. Notre objectif était de proposer un protocole expérimental qui devrait mener au tracé de courbes de survie obtenues après l'irradiation de cultures cellulaires de lymphome canin à partir de la lignée CLB1 (un lymphome B de haut grade). L'exploitation de ces courbes devrait permettre de confirmer et quantifier de manière relative le caractère radiosensible de cette lignée cellulaire de lymphome mais également d'en extraire les valeurs ? et ?, valeurs qui permettraient d'optimiser les protocoles de radiothérapie à appliquer dans le lymphome canin multicentrique de haut grade, probablement en traitement complémentaire à la chimiothérapie de type CHOP.
[-] Le lymphome est l'hémopathie maligne la plus représentée chez le chien. Cette entité polymorphe peut infiltrer l'ensemble de l'organisme. Ces formes anatomocliniques sont variées tout comme les entités qui les composent. Sa forme la plus fréquente, la forme multicentrique représente un véritable challenge thérapeutique puisqu'actuellement les traitements proposés sont uniquement palliatifs. La radiothérapie, méthode thérapeutique largement ...
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