Les virus influenza aviaires hautement pathogènes représentent un enjeu économique et sanitaire majeur. Il n'est actuellement pas possible de prédire l'émergence de ces virus. L'objectif du projet RISKEVOL est de comprendre comment la séquence de l'hémagglutinine pourrait influencer l'acquisition d'un site de clivage polybasique. Ce travail a permis l'élaboration d'une nouvelle méthode d'analyse des mutations de l'hémagglutinine qui permet de s'affranchir de la pression de sélection, le système mini-génome 977. Il consiste à reconstituer le complexe polymérase du virus H7N1 977 pour répliquer des séquences ARN d'intérêt. Il a été utilisé avec les séquences HA des virus H5N3 ShimH5 et ShimH524a2b. Les ARN produits ont été séquencés par une méthode de séquençage haut débit et les résultats convergent avec ceux obtenus par d'autres méthodes produites par l'UMR 1225 IHAP : la séquence nucléotidique exerce une influence sur le taux d'erreur des polymérases des virus influenza aviaires.[-]

L'objectif de ce travail est de développer une méthode d'analyse de l'évolution de l'HA des virus influenza aviaires, virus avec un enjeu sanitaire et économique important. Pour déterminer les sites préférentiels d'insertion de nucléotides dans a séquence d'HA et si certaines séquences nucléotidiques sont associées à un plus fort taux d'insertion, nous avons réalisé de la mutagénèse dirigée pour produire des plasmides contenant une HA non fonctionnelle car présentant une codon stop ATG à la place de son codon départ. Puis un protocole de génétique inverse avec une transcomplémentation a été utilisé. L'utilisation de cellules MDCK exprimant à leur surface une HA transcomplémentantea permis le production de virions possédant un segment HA muté ?ATG. Cependant l'amplification des virus obtenus n'a pas fonctionné. D'autres expériences doivent compléter notre étude.   The objective of our study is to develop a method for analyzing the evolution of HA ofavian influenza viruses, viruses with a major health and economic effect. To determine the preferred nucleotide insertion sites in the HA sequence and whether some nucleotide sequences are associated with a higher rate of insertion, we performed site-directed mutagenesis to produce plasmids containing a non-functional HA because it has an ATG stop codon in place of its start codon. Then a reverse genetics protocol with transcomplementation wasused. The use of MDCK cells expressing on their surface an HA allowed the production of virion possessing a mutated HA ?ATG segment. However, the amplification of the resulting viruses did not work. Other experiences should complement our study.[-]