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Etablissement et exploitation d'une lignée cellulaire de gliome canin pour la recherche thérapeuthique

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Thèse

Url / Doi : http://www2.vetagro-sup.fr/bib/fondoc/th_sout/dl.php?file=20...

Localisation : Env Alfort (Bibliothèque)

N° de thèse : 27

Titre anglais : Establishment and characterization of a canine glioma cell line for therapeutic research.

En ligne : Oui

Type de fond : Fonds contemporain

Les gliomes sont les tumeurs de l’encéphale les plus fréquentes chez l’Homme et elles se caractérisent par un pronostic effroyable. En l’absence de traitement efficace, la recherche oncologique pourrait s’appuyer sur le modèle canin pour ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques. C’est dans ce cadre que s’inscrit notre étude, axée autour de l’intérêt de l’établissement de lignées cellulaires canines dans la recherche oncologique translationnelle. Dans une première partie bibliographique, les étapes du développement d’une lignée cellulaire sont décrites, depuis la culture primaire initiale jusqu’à son immortalisation et exploitation dans le domaine de la recherche thérapeutique. Dans une seconde partie expérimentale, nous avons cherché à établir et exploiter des lignées cellulaires de gliome canin. Une première culture mise en place à partir d’un fragment de tumeur cérébrale n’a pu être immortalisée, tandis qu’une seconde, issue de la décongélation d’une culture de gliome déjà établie au sein du laboratoire d’accueil a pu être exploitée. La caractérisation de cette dernière par immunomarquage sur Histogel® a mis en évidence une expression de la vimentine, de la GFAP et une absence d’expression des protéines Olig-2, et S100. Ces résultats sont compatibles avec une tumeur gliale peu différenciée. La sensibilité de cette lignée à la doxorubicine a été testée à l’aide de deux tests de chimiosensibilité, un test de viabilité au bleu Trypan et une immunodétection sur Histogel® de la caspase-3 clivée, marqueur de l’apoptose induite par le traitement. Un premier protocole permettant d’évaluer l’effet de deux concentrations de doxorubicine (1 µg/mL et 10 µg/mL) sur trois densités cellulaires différentes (20 000, 50 000 et 100 000 cellules/mL) a été mis en place afin d’établir une concentration cellulaire minimale efficace. Les résultats obtenus n’ont pu être interprétés en raison du nombre insuffisant de cellules. Un second protocole a testé deux concentrations de doxorubicine (10 et 50 µg/mL) sur une densité cellulaire fixe d’environ 300 000 cellules/mL. Le test de viabilité au bleu Trypan révèle alors une nette diminution de viabilité cellulaire corrélée à la concentration de doxorubicine. Ces résultats sont confirmés par l’immunodétection sur Histogel® de la caspase-3 clivée mettant en évidence une expression forte dans les cellules mises au contact de la doxorubicine, révélateur d’un processus d’apoptose. Ces résultats permettent ainsi de valider ce protocole qui pourra par la suite être utilisé sur d’autres agents cytotoxiques plus spécifiques des gliomes, tels que les agents alkylants dont le Temozolomide. Il valide également l’intérêt de l’immunohistochimie pour l’évaluation de l’efficacité thérapeutique de drogues testées in vitro.

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