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De nombreux chats sont atteints de maladie rénale chronique, la majorité d'entre eux souffrant également d'anémie chronique. En effet, le rein est de loin le principal organe responsable de la synthèse de l'érythropoïétine au sein de l'organisme, un facteur de croissance majeur des érythrocytes. Dans l'objectif d'une amélioration de la qualité de vie des chats souffrant d'anémie chronique, un médicament provenant de la pharmacopée humaine a commencé à être utilisé chez le chat. Cependant, bien que le médicament soit bien toléré et très efficace en médecine humaine, les cliniciens observent des échecs thérapeutiques fréquents chez les chats traités par ce médicament. Il s'agit de la darbépoétine, une érythropoïétine de synthèse réalisée à partir de la séquence protéique de l'érythropoïétine humaine. Or, la darbépoétine ne possède que 82% d'homologie de séquence avec l'érythropoïétine endogène féline contre 95% avec l'érythropoïétine endogène humaine. Nous avons donc émis l'hypothèse de la présence d'une réaction immunogène médiée par des anticorps dirigés contre ce médicament humain au sein de l'espèce féline. Nous avons réussi à mettre au point un modèle ELISA dans lequel nous avons pu détecter la présence de ces anticorps anti-darbépoétine chez deux chats sur trois testés. Il semblerait donc qu'il existe des anticorps anti-darbépoétine chez le chat. Cependant, il reste encore à réaliser d'autres études complémentaires avec un nombre conséquent d'échantillons, de manière à conclure sur le lien statistique entre la présence de ces anticorps anti-darbépoétine et l'efficacité du traitement à la darbépoétine chez le chat. À l'avenir, l'objectif serait de créer un test rapide ELISA sur le même modèle que celui façonné par nos soins, utilisable en routine par les cliniciens, directement au chevet du patient.
[-] De nombreux chats sont atteints de maladie rénale chronique, la majorité d'entre eux souffrant également d'anémie chronique. En effet, le rein est de loin le principal organe responsable de la synthèse de l'érythropoïétine au sein de l'organisme, un facteur de croissance majeur des érythrocytes. Dans l'objectif d'une amélioration de la qualité de vie des chats souffrant d'anémie chronique, un médicament provenant de la pharmacopée humaine a ...
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La thrombopénie à médiation immune primaire est une maladie rare dont la compréhension de sa pathogénie évolue rapidement et est aujourd'hui connue pour être le résultat d'une combinaison d'une réponse immunitaire à médiation humorale et cellulaire en défaveur des plaquettes et des mégacaryocytes. Elle est à distinguer des thrombopénies à médiation immunes secondaires, à une néoplasie, une infection, un processus inflammatoire ou une réaction médicamenteuse. Le diagnostic de cette maladie peut représenter un défi pour le clinicien car il constitue un diagnostic d'exclusion qui de plus, est chronophage. La détection d'anticorps liés aux plaquettes permettrait de mettre en évidence l'existence d'un processus dysimmunitaire primaire ou secondaire et plusieurs études ont mis au point un protocole permettant de détecter ces anticorps par cytométrie en flux. Le but de ce travail est donc de développer un protocole adapté au Biopôle, laboratoire d'analyses vétérinaires présent sur le site de l'École Nationale Vétérinaire d'Alfort, et de confronter les résultats à ceux d'un test ELISA permettant de mettre en évidence les anticorps dirigés contre les plaquettes dans le plasma des patients. Une analyse de cytométrie en flux directe a donc été effectuée sur 19 chiens sains et 14 chiens atteints de thrombopénie, dont 4 atteints de thrombopénie à médiation immune primaire. Les analyses de cytométrie ont été réalisées après isolement d'un plasma riche en plaquettes (PRP) et marquage par des anticorps anti-IgG canins. Un seuil de positivité égal à 10% de plaquettes fluorescentes par analyse cytométrique, mis en place par l'étude de Shropshire et al. (2018), a été choisi. L'intégralité des échantillons des chiens sains a présenté un résultat inférieur à 6%. Ces échantillons ont donc été qualifiés de négatifs, la moyenne de fluorescence étant de 1,6%. La moyenne de fluorescence des plaquettes des échantillons de chiens atteints de thrombopénies à médiation immune, toute causes confondues, était de 28%, soit fortement supérieure à celle des chiens sains. Trois prélèvements de chiens atteints de thrombopénie non immune ont été analysés et ont présenté une moyenne de fluorescence de 1%. Les faibles effectifs des chiens atteints de thrombopénie n'ont pas permis de réaliser d'analyses statistiques, ni d'observer une corrélation avec le test ELISA, mais les résultats de cytométrie de flux semblent montrer une différence notable de fluorescence chez les chiens atteints de thrombopénies à médiation immune par rapport aux autres causes de thrombopénies et aux chiens sains. Cette étude a donc permis de valider le protocole d'isolement du PRP et de marquage des plaquettes par les anticorps. De plus grands effectifs sont à présent nécessaires pour valider la cytométrie de flux pour la détection d'anticorps liés aux plaquettes.
[-] La thrombopénie à médiation immune primaire est une maladie rare dont la compréhension de sa pathogénie évolue rapidement et est aujourd'hui connue pour être le résultat d'une combinaison d'une réponse immunitaire à médiation humorale et cellulaire en défaveur des plaquettes et des mégacaryocytes. Elle est à distinguer des thrombopénies à médiation immunes secondaires, à une néoplasie, une infection, un processus inflammatoire ou une réaction ...
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Il s'est écoulé quelques dizaines de millions d'années depuis l'émergence des anticorps conventionnels jusqu'à la découverte en 1993 des anticorps à domaines uniques (sdAbs ou VHH) dépourvus de chaînes légères, également connus sous le nom de nanocorps, chez les lamas et autres camélidés. Les raisons de leurs conditions d'apparition ne sont pas encore totalement élucidées, mais il ne fait aucun doute qu'ils doivent permettre une réponse immunitaire adaptative remarquable chez ces espèces de camélidés (Camelus dromedarius et Camelus bactrianus), de lamas et alpagas (Lama glama, Lama pacos et Lama guanicoe), de vigognes (Vicugna vicugna et Vicugna pacos), mais aussi de poissons cartilagineux, chez lesquels ils sont également présents. En effet, une pression de sélection a certainement permis leur émergence au sein de taxons variés, où ils sont retrouvés, circulants dans le plasma, en diverses proportions. Leurs caractéristiques morphologiques et physico-chimiques, à savoir leur petite taille (~15kDa), leur haute affinité, leur forte spécificité, leur faible immunogénicité, leur modularité, leur simplicité de production, leur stabilité et résistance à des conditions environnementales extrêmes, leur permettent de devenir des outils de biotechnologie intéressants. Leur production, basée sur l'immunisation de camélidés, et leur sélection via des techniques de « phage display », permet de produire de grandes bibliothèques d'anticorps, et à faible coût. Actuellement à l'étude, et parfois même en cours de développement, les nanocorps trouvent des domaines d'application dans les milieux de la recherche, la médecine et l'industrie. Outils d'imagerie médicale, thérapie contre le cancer, dépistage précoce et perspectives de traitement de la maladie d'Alzheimer, développement de médicaments et vaccins, outils diagnostics, sont autant de possibilités qui s'offrent aux nanocorps. Ces petites molécules ont indéniablement un avenir prometteur devant elles.
[-] Il s'est écoulé quelques dizaines de millions d'années depuis l'émergence des anticorps conventionnels jusqu'à la découverte en 1993 des anticorps à domaines uniques (sdAbs ou VHH) dépourvus de chaînes légères, également connus sous le nom de nanocorps, chez les lamas et autres camélidés. Les raisons de leurs conditions d'apparition ne sont pas encore totalement élucidées, mais il ne fait aucun doute qu'ils doivent permettre une réponse ...
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